автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года 




Скачать 167.54 Kb.
PDF просмотр
Название  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года 
страница6/11
Дата конвертации20.12.2012
Размер167.54 Kb.
ТипАвтореферат
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11

1.6. 
Изучение влияния внутреннего Rho-независимого терминатора транскрипции на 
экспрессию дистальных генов pur-оперона.  
Анализ  нуклеотидной  последовательности  генов  pur-оперона    позволяет  выявить 
наличие  потенциального  Rho-независимого  терминатора  транскрипции,  локализованного 
между  генами  purF  и  purM    (TF-M)  (рис.  1),  однако  какие-либо  данные  о  функциональной 
значимости  этого  терминатора  транскрипции  в  литературе  отсутствуют.  Поэтому  мы 
предприняли  получение  прецезионной  делеции  (∆TF-M)  полностью  удаляющей  терминатор 
транскрипции в межгенном участке purF-purM  pur-оперона в составе хромосомы штамма B. 
subilis Mu8u5u6. Для изучения влияния делеции ∆TF-M на экспрессию дистальных генов pur-
оперона были сконструированы транскрипционные фьюзы последнего гена purD с реперным 
геном  lacZ.  Аналогичным  образом  была  сконструирована  изогенная  пара  штаммов, 
содержащая  описанную выше делецию ∆TL в лидерной области pur-оперона. У полученных 
изогенных  штаммов  определяли  активность  β-галактозидазы  на  различных  стадиях  роста 
бактериальных культур (Таблица 2). 
Таблица 2. 
Активность β-галактозидазы в бесклеточных экстрактах штаммов, содержащих 
транскрипционные фьюзы purD-lacZ
Генотип 
Активность β-галактозидазы* 
2.5 ч 
6 ч 
24 ч 
Дикий тип 
160±15 (1) 
254±28 (1) 
73±10 (1) 
∆T F-M 
220±20 (1.4) 
516±60 (2) 
224±25 (3) 
∆TL 
1596±120 (1) 
1890±130 (1) 
1202±120 (1) 
∆T∆T F-M 
2289±160 (1.4) 
3246±200 (1.7) 
2925±200 (2.4) 
*В скобках приведена кратность увеличения активности фермента у штаммов, содержащих  
делецию ∆T F-M  относительно штаммов дикого типа. 
 
Как  следует  из  данных,  представленных  в  таблице  2,  удаление  терминатора 
транскрипции  TF-M  приводит  к  одинаковому  примерно  1,5-кратному  усилению  экспрессии 
дистального  гена  purD  у  бактерий,  находящихся  в  логарифмической  стадии  роста  как  у 
штамма,  содержащего  лидерную  область  pur-оперона  дикого  типа,  так  и  у  штамма  с 
делецией ∆TL. На стационарной стадии роста позитивный эффект удаления терминатора ∆T 
F-M на экспрессию дистального гена purD проявляется еще сильней, что выражается в 2,5-3-х 
кратном повышении уровня активности β-галактозидазы у соответствующих штаммов (Табл. 
2). 
2.  Особенности структурно-функциональной организации лидерной области гена pbuE 
Bacillus subtilis и его регуляции. 
Ген  pbuE  B.  subtilis  кодирует  синтез  трансмембранного  белка,  ответственного  за 
транспорт  из  клетки  пуриновых  оснований  и  локализуется  на  53.50o  хромосомной  карты. 
Первоначально было показано, что экспрессия гена pbuE возрастает при добавлении в среду 
пуриновых  оснований,  в  частности,  гуанина  и  гипоксантина,  однако  механизм  этой 
регуляции оставался неясным.  
10 
 



Сравнение  нуклеотидной  последовательности  лидерной  мРНК  генов  xpt  и  pbuE 
обнаруживает  большую  гомологию  (рис.  7),  особенно  в  участках,  расположенных  между 
шпильками  и  выявляет  возможность  формирования  трех  потенциальных  шпилечных 
структур (P1/P1’, P2/P2’ и P3/P3’) – рис. 8. 
 
Рисунок 7.  Сравнение нуклеотидной последовательности лидерных областей мРНК генов 
xpt и pbuE B. subtilis
Выделены  три  потенциальные  шпилечные  структуры  (P1/P1’,  P2/P2’  и  P3/P3’).  Гомологичные 
основания  подчеркнуты.  Жирным  шрифтом  выделены  основания,  в  которых  были  получены 
мутации,  а  соответствующие  нуклеотидные  замены  указаны  стрелками.  Нумерация  нуклеотидов 
приведена, начиная со стартов транскрипции генов xpt и pbuE. 
 
 
Рисунок 8. Модель вторичной структуры А-бокса гена pbuE B. subtilis
А. Конфигурация А-бокса в присутствии эффектора – аденина. Терминирующая шпилька разрушена, 
происходит сквозная транскрипция структурного гена pbuE
Б.  Формирование  терминирующей  шпильки  в  А-боксе  в  отсутствии  аденина.  Транскрипция 
структурного  гена  pbuE  заблокирована.  Рамками  выделены  основания,  в  которых  были  получены 
мутации.  
Более  того,  выяснилось,  что  лидерная  мРНК  гена  pbuE  также  выполняет  сенсорную 
функцию, но, в отличие от G-бокса гена xpt , эффектором этой мРНК служит не гуанин или 
11 
 
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11

Похожие:

  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  icon  автореферат диссертации разослан «30» октября 2012 года. 
В. С. Елистратова,  С. И. Левиковой,  В. М. Мокиенко,  Т. Г. Никитиной  и  др.,  со
  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  icon  автореферат разослан  «    » сентября 2010 года. 

  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  iconАвтореферат разослан 30 сентября 2006 года. 
Терминология.  В  диссертационной  работе,  для  изложения  результатов  исследования 
  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  icon  автореферат разослан 15 сентября 2009 г. 
Декларации  принципов  толерантности  (1995  г.).  В  преамбуле  характеризуется 
  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  icon  автореферат разослан «22»  сентября 2010 г. 
В  настоящее  время  одной  из  актуальных  проблем  современной  регенеративной 
  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  icon  автореферат разослан «       » сентября 2007 г. 
Гоу впо «Российский государственный   профессионально-педагогический университет»  
  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  icon  автореферат разослан       апреля 2008 года 

  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  icon  автореферат разослан « 2 »  ноября  2010 года. 
На  1  января  2009  года  в  Италии  зарегистрировано  почти  4  млн.  279  тыс. 
  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  icon  автореферат разослан « 13  » апреля 2007 года 
Ведущая организация: фгу  Всероссийский государственный центр                                            
  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  iconАвтореферат диссертации на соискание ученой степени
Защита   диссертации   состоится   19   октября   2012   г.   в   11   часов   на   заседании 
Разместите кнопку на своём сайте:
kak.znate.ru


База данных защищена авторским правом ©kak.znate.ru 2012
обратиться к администрации
KakZnate
Главная страница