автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года 




Скачать 167.54 Kb.
PDF просмотр
Название  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года 
страница10/11
Дата конвертации20.12.2012
Размер167.54 Kb.
ТипАвтореферат
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11


в  КЖ.  Внесение  мутаций  purR::neo  и  ∆TL  (штамм  АМ778),  обеспечивающих  полную 
дерепрессию  ферментов  биосинтеза  пуринов,  приводит  к  существенному  увеличению 
накопления AICAR до 4-5 г/л. 
 
 
Рисунок 13. Схема конструирования штаммов-продуцентов c указанием их продуктивности 
в отношении накопления AICAR 
Дальнейшее  почти  двухкратное  увеличение  продуктивности  наблюдается  у  штаммов 
АМ811 
и 
АМ813, 
в 
клетках 
которых 
экспрессируется 
один 
из 
мутантных 
десенсибилизированных    белков      E.  coli  –  PRPP-синтаза  (ген  prs)  или  глютамин-PRPP-
аминотрансфераза (ген purF), соответственно.  
Максимальное  накопление    AICAR  до  11-13  г/л  обнаруживается  у  штамма  АМ815, 
характеризующегося  полной  дерепрессией  ферментов  биосинтеза  пуринов  и  одновременно 
содержащего модифицированные гены prsE  и  purFE  под контролем промотора PrpsF.    
 
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 
Главным  итогом  настоящей  работы  является  установление  важной  роли  сенсорных 
РНК в регуляции пуринового метаболизма. 
Результаты 
мутационного 
анализа 
структурно-функциональной 
организации 
лидерной  области  pur-оперона  и  данные  in  vitro  позволяют  сделать  заключение  о  том,  что 
регуляция экспрессии этого оперона осуществляется с помощью сенсорной РНК в результате 
ее связывания со специфическими метаболитами-эффектороми  гуанином и гипоксантином, 
как  это  было  показано  ранее  на  модели  xpt-pbuX-оперона    B.  subtilis.  Полученные 
экспериментальные  данные  подтверждают  модель  регуляции  pur-оперона,  приведенную  на 
рис.  3,  согласно  которой,  связывание  пуриновых  оснований  стабилизирует  шпилечную 
структуру  P:P’  и,  тем  самым,  способствует  образованию  шпильки  T:T',  формирующей 
типичный  Rho-независимый  терминатор  транскрипции.  Интересно  отметить,  что,  несмотря 
18 
 


на  некоторые  различия  в  нуклеотидном  составе  G-бокса  пуриновых  сенсорных  РНК  pur-  и 
xpt-pbuX-оперонов  B.  subtilis,  в  качестве  наиболее  эффективного  метаболита-эффектора  в 
обоих  случаях  выступает  гуанин,  а  не  гипоксантин.  Общий  план  расположения 
нуклеотидных  мотивов,  формирующих  альтернативные  шпилечные  структуры  в  процессе 
фолдинга  сенсорных  РНК  этих  оперонов,  также  обнаруживает  большое    сходство.  Кроме 
того,  полученные  нами  данные  хорошо  согласуются  с  результатами  рентгеноструктурного 
анализа  G-бокса  xpt-pbuX-оперона  B.  subtilis,  в  соответствии  с  которыми  метаболит-
связывающий  «карман»  G-бокса    формируется  за  счет  водородных  связей  гуанина  с 
нуклеотидами U22, U47, U51 и C74 (рис. 14).  
 
Рисунок 14. Взаимодействие гуанина с метаболит-связывающим «карманом» 
G-бокса xpt-pbuX-оперона B. subtilis 
Взаимодействие  гуанина  (обозн.  голубым)  с  «карманом»  из  консервативных  пиримидиновых 
остатков  (обозн.  зеленым).  Лиганд  взаимодействует  с  РНК  в  основном  через  водородные  связи 
(обозн. черным пунктиром) между пиримидинами 51 и 74. 
Полученные  нами  нуклеотидные  замены  именно  в  этих    положениях  лидерной  РНК  pur-
оперона    U47→C  (мутант  AM612-М2)  и    U51→C    (мутант  AM612-М4)  сопровождались 
практически полной потерей чувствительности к гуанину как в опытах in vivo (рис. 5), так и 
in vitro (рис. 6). В то же время расположенные рядом нуклеотидные замены А44→G, T48→C 
и C53→T не приводили к существенному изменению регуляции pur-оперона.   
Еще  более  выраженный  гуанин-независимый  фенотип  обнаруживал  мутант  AM612-
M6,  содержащий  замену  C76→U.  По  своей  функциональной  значимости  этот  цитозин  в 
положении  76  pur-оперона,  по-видимому,  идентичен  цитозину  в  положении  74  xpt-pbuX-
оперона  (рис.  14),  которому  приписывают  ключевую  роль  в  распознавании  и  связывании 
соответствующей сенсорной РНК с метаболитами-эффекторами гуанином и гипоксантином.  
Таким  образом,  полученные  данные  позволяют  заключить,  что  изученная  нами  лидерная 
область  pur-оперона,  несмотря  на  некоторые  различия  в  первичной  структуре,  по  своей 
структурно-функциональной  организации  и  специфичности  связывания  с  метаболитами-
эффекторами  мало  отличается  от  детально  исследованной  сенсорной  РНК,  кодируемой  xpt-
pbuX-опероном.  
 
При  выяснении вопроса об относительной роли регуляции pur-оперона, действующей 
на  уровне  инициации    транскрипции  с  участием  белка-репрессора  PurR,  и    контроля  его 
экспрессии на уровне терминации транскрипции посредством сенсорной РНК, мы показали, 
19 
 
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11

Похожие:

  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  icon  автореферат диссертации разослан «30» октября 2012 года. 
В. С. Елистратова,  С. И. Левиковой,  В. М. Мокиенко,  Т. Г. Никитиной  и  др.,  со
  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  icon  автореферат разослан  «    » сентября 2010 года. 

  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  iconАвтореферат разослан 30 сентября 2006 года. 
Терминология.  В  диссертационной  работе,  для  изложения  результатов  исследования 
  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  icon  автореферат разослан 15 сентября 2009 г. 
Декларации  принципов  толерантности  (1995  г.).  В  преамбуле  характеризуется 
  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  icon  автореферат разослан «22»  сентября 2010 г. 
В  настоящее  время  одной  из  актуальных  проблем  современной  регенеративной 
  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  icon  автореферат разослан «       » сентября 2007 г. 
Гоу впо «Российский государственный   профессионально-педагогический университет»  
  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  icon  автореферат разослан       апреля 2008 года 

  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  icon  автореферат разослан « 2 »  ноября  2010 года. 
На  1  января  2009  года  в  Италии  зарегистрировано  почти  4  млн.  279  тыс. 
  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  icon  автореферат разослан « 13  » апреля 2007 года 
Ведущая организация: фгу  Всероссийский государственный центр                                            
  автореферат диссертации разослан  «  6  »  сентября   2011 года  iconАвтореферат диссертации на соискание ученой степени
Защита   диссертации   состоится   19   октября   2012   г.   в   11   часов   на   заседании 
Разместите кнопку на своём сайте:
kak.znate.ru


База данных защищена авторским правом ©kak.znate.ru 2012
обратиться к администрации
KakZnate
Главная страница